Amidaza (AMD)
Enzimi:Su makromolekularni biološki katalizatori, većina enzima su proteini
Amidaza:Kataliziraju hidrolizu različitih endogenih i stranih alifatskih i aromatskih amida prenosom acil grupe u vodu uz proizvodnju slobodnih kiselina i amonijaka. Hidroksamske kiseline i druge organske kiseline se široko koriste kao lijekovi jer su sastojci faktora rasta, antibiotika i inhibitora tumora. Amidaze se mogu podijeliti na acilaze R tipa i S tipa prema stereoselektivnosti katalizatora.
Pored kataliziranja hidrolize amida, amidaza može također katalizirati reakcije prijenosa acila u prisustvu kosupstrata kao što je hidroksilamin.
Amidaze iz različitih izvora imaju različitu specifičnost supstrata, neke od njih mogu hidrolizovati samo aromatične amide, neke samo alifatične amide, a neke hidrolizuju α- ili ω-amino amide. Većina amina ima dobru katalitičku aktivnost samo za acikličke ili jednostavne aromatične amide, ali za složene aromate, heterociklički amidi, posebno amidi sa orto supstituentima, uglavnom imaju nisku aktivnost (samo nekoliko enzima pokazuje bolje katalitičke efekte).
Katalitički mehanizam:
| Enzimi | Šifra proizvoda | Šifra proizvoda |
| Enzimski prah | ES-AMD-101~ ES-AMD-119 | set od 19 amidaza, 50 mg svaka 19 artikala * 50 mg / artikal, ili druga količina |
| Komplet za skrining (SynKit) | ES-AMD-1900 | set od 19 amidaza, 1 mg svaka 19 artikala * 1 mg / artikal |
★ Visoka specifičnost supstrata.
★ Jaka kiralna selektivnost.
★ Visoka efikasnost konverzije.
★ Manje nusproizvoda.
★ Blagi uslovi reakcije.
★ Ekološki prihvatljivo.
➢ Zbog specifičnosti supstrata, skrining enzima treba provoditi za specifične supstrate, te odabrati enzim koji katalizira ciljni supstrat s najboljim katalitičkim učinkom.
➢ Nikada ne dodirujte ekstremne uslove kao što su: visoka temperatura, visok/nizak pH i organski rastvarači visoke koncentracije.
➢ Normalno, reakcijski sistem treba da uključuje supstrat, puferski rastvor (optimalni pH reakcije enzima). Kosupstrati poput hidroksilamina trebaju biti prisutni u reakcijskom sistemu transfera acila.
➢ AMD treba dodati posljednji u reakcijski sistem s optimalnim pH i temperaturom reakcije.
➢ Sve vrste AMD-a imaju različite optimalne reakcijske uvjete, tako da svaku od njih treba dalje proučavati pojedinačno.
Primjer 1(1):
Aktivnost hidrolize na različitim amidnim supstratima
| Podloga | Specifična aktivnost μmol min-1mg-1 | Podloga | Specifična aktivnost μmol min-1mg-1 |
| Acetamid | 3.8 | ο-OH benzamid | 1.4 |
| Propionamid | 3.9 | p-OH benzamid | 1.2 |
| Laktamid | 12,8 | ο-NH2benzamid | 1.0 |
| Butiramida | 11.9 | p-NH2benzamid | 0,8 |
| Izobutiramida | 26.2 | ο-Toluamid | 0,3 |
| Pentanamid | 22,0 | p-Toluamid | 8.1 |
| Heksanamid | 6.4 | Nikotinamid | 1,7 |
| Cikloheksanamid | 19,5 | Izonikotinamid | 1.8 |
| Akrilamid | 10.2 | Pikolinamid | 2.1 |
| Metakrilamid | 3,5 | 3-Fenilpropionamid | 7.6 |
| Prolinamid | 3.4 | Indol-3-acetamid | 1.9 |
| Benzamid | 6.8 |
Reakcija je provedena u 50 mM rastvoru natrijum fosfatnog pufera, pH 7,5, na 70 ℃.
| Amidi | Hidroksilamin | Hidrazin |
| Acetamid | 8.4 | 1.4 |
| Propionamid | 18,4 | 3.0 |
| Izobutiramida | 25,0 | 22,7 |
| Benzamid | 9.2 | 6.1 |
Reakcija je provedena u 50 mM rastvoru natrijum fosfatnog pufera, pH 7,5, na 70 ℃.
Povezana koncentracija reagensa: amidi, 100 mM (benzamid, 10 mM); hidroksilamin i hidrazin, 400 mM; enzim 0,9 μM.
Primjer 2(2):
Primjer 3(3):
1. D'Abusco AS, Ammendola S., et al. Extremophiles, 2001, 5:183-192.
2. Guo FM, Wu JP, Yang LR, et al. Procesna biohemija, 2015, 50(8): 1400-1404.
3. Zheng RC, Jin JQ, Wu ZM, et al. Bioorganska hemija, 2017, Dostupno online 7.
