amidaza (AMD)
enzimi:Makromolekularni biološki katalizatori, većina enzima su proteini
amidaza:Katalizuju hidrolizu različitih endogenih i stranih alifatskih i aromatskih amida prenošenjem acilne grupe u vodu uz proizvodnju slobodnih kiselina i amonijaka.Hidroksaminske kiseline i druge organske kiseline se široko koriste kao lijekovi jer su sastojci faktora rasta, antibiotika i inhibitora tumora.Amidaze se mogu podijeliti na acilaze R tipa i S tipa prema stereoselektivnosti katalizatora.
Osim što katalizuje hidrolizu amida, amidaza također može katalizirati reakcije prijenosa acila u prisustvu kosupstrata kao što je hidroksilamin.
Amidaze sa različitim izvorima imaju različite specifičnosti supstrata, neke od njih mogu samo hidrolizirati aromatične amide, neke od njih mogu samo hidrolizirati alifatske amide, a neke hidrolizirati α- ili ω-amino amide.Većina amina ima dobru katalitičku aktivnost samo za aciklične ili jednostavne aromatske amide, ali za složene aromatike, heterociklički amidi, posebno amidi sa orto supstituentima, općenito su niske aktivnosti (samo nekoliko enzima pokazuje bolje katalitičke efekte).
Katalitički mehanizam:
| Enzimi | Kod proizvoda | Kod proizvoda |
| Enzimski prah | ES-AMD-101~ ES-AMD-119 | set od 19 amidaza, 50 mg svaka 19 artikala * 50 mg/komad, ili druga količina |
| Komplet za skrining (SynKit) | ES-AMD-1900 | set od 19 amidaza, po 1 mg svaki 19 stavki * 1mg/kom |
★ Visoka specifičnost supstrata.
★ Jaka kiralna selektivnost.
★ Visoka efikasnost konverzije.
★ Manje nusproizvoda.
★ Blagi uslovi reakcije.
★ Ekološki prihvatljivo.
➢ Enzimski skrining treba izvršiti za specifične supstrate zbog specifičnosti supstrata i dobiti enzim koji katalizuje ciljni supstrat sa najboljim katalitičkim efektom.
➢ Nikada nemojte doći u kontakt sa ekstremnim uslovima kao što su: visoka temperatura, visok/nizak pH i organski rastvarač visoke koncentracije.
➢ Normalno, reakcioni sistem treba da uključuje supstrat, puferski rastvor (optimalni reakcioni pH enzima).Ko-supstrati kao što je hidroksilamin treba da budu prisutni u reakcijskom sistemu acil transfera.
➢ AMD treba dodati zadnji u reakcioni sistem sa optimalnim pH i temperaturom reakcije.
➢ Sve vrste AMD-a imaju različite optimalne reakcione uslove, tako da svaki od njih treba dalje proučavati pojedinačno.
Primjer 1(1):
Aktivnost hidrolize na različite amidne supstrate
| Supstrat | Specifična aktivnost μmol min-1mg-1 | Supstrat | Specifična aktivnost μmol min-1mg-1 |
| Acetamid | 3.8 | ο-OH benzamid | 1.4 |
| propionamid | 3.9 | p-OH benzamid | 1.2 |
| Laktamid | 12.8 | ο-NH2benzamid | 1.0 |
| Butyramide | 11.9 | p-NH2benzamid | 0.8 |
| izobutiramid | 26.2 | ο-Toluamid | 0.3 |
| Pentanamid | 22.0 | p-Toluamid | 8.1 |
| Heksanamid | 6.4 | nikotinamid | 1.7 |
| Cikloheksanamid | 19.5 | izonikotinamid | 1.8 |
| Akrilamid | 10.2 | Picolinamide | 2.1 |
| Metacrylamide | 3.5 | 3-fenilpropionamid | 7.6 |
| Prolinamid | 3.4 | Indol-3-acetamid | 1.9 |
| Benzamid | 6.8 |
Reakcija je izvedena u 50 mM rastvoru pufera natrijum fosfata, pH 7,5, na 70 ℃.
| Amidi | Hidroksilamin | Hidrazin |
| Acetamid | 8.4 | 1.4 |
| propionamid | 18.4 | 3.0 |
| izobutiramid | 25.0 | 22.7 |
| Benzamid | 9.2 | 6.1 |
Reakcija je izvedena u 50 mM rastvoru pufera natrijum fosfata, pH 7,5, na 70 ℃.
Povezana koncentracija reagensa: amidi, 100 mM (benzamid, 10 mM);hidroksilamin i hidrazin, 400 mM;enzim 0,9 μM.
Primjer 2(2):
Primjer 3(3):
1. D'Abusco AS, Ammendola S., et al.Extremophiles, 2001, 5:183-192.
2. Guo FM, Wu JP, Yang LR, et al.Process Biochemistry, 2015, 50(8): 1400-1404.
3. Zheng RC, Jin JQ, Wu ZM, et al.Bioorganska hemija, 2017, dostupno na mreži 7.
